外泌体电镜检测-科锐诺生物科技(在线咨询)
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iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation,同位素标记相对和绝1对定量)是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝1对定量技术。该技术使用8种(或4种)不同的同位素试剂来同时标记和比较8种(或4种)不同的蛋白质样品。这些试剂由3个不同的化学标签组成:报告部分,肽反应部分和平衡部分。报告部分为客户可按需选择标记个数,肽反应基团将iTRAQ标签与肽段的N-端基团和每个赖氨酸侧链相连,可标记所有酶解肽段,平衡部位可保证iTRAQ试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比,因此改变任一iTRAQ试剂,不同同位素在标记同一多肽后在一级质谱检测,分子量都完全相同。而在串联质谱中,同重元素标记肽段平衡基团在二级质谱发生中性丢失。信号离子表现为不同质荷比的峰,因此,根据波峰的高度及面积,可以得到蛋白质的定量信息。

除了用NTA方法,该团队另基于acetylcholinesterase(一种已知的外泌体表达蛋白)评估三种试剂盒提取外泌体的得率。从NTA结果看,对于血1清和血浆样本,Exo-spin的提取量高,是其他两种试剂盒的1-3倍;相对来说,脑脊髓液的提取率都比较低,ExoQuick™提取得到的外泌体浓度低。从基于acetylcholinesterase的分析结果看,其数值高于NTA方法,且Exo-spin得到的外泌体浓度高于其他两种试剂盒。

外泌体上的TNF家族蛋白不能被膜型金属蛋白酶切割,故较为稳定,同时借助膜形成三聚体,具有很强的诱导细胞凋亡的活性。而且,人们认为外泌体的转运TNF家族蛋白,与各种炎1症疾病和自身免1疫疾病的产生相关。
例如,从类风1湿关1节炎患者的滑膜成纤维细胞中释放出来的外泌体上,聚集高浓度的膜结合型TNF-α,会加重类风1湿关1节炎病情。