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武汉科锐诺(多图)-植物基因组原位杂交测试服务

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菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。

(6) 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。











近年来基因检测在结1核病诊断中应用越来越广泛,但主要应用于痰液等新鲜标本,在石蜡包埋组织标本中应用非常少。我们建立了利用荧光定量PCR及膜探针杂交法鉴别诊断结1核病与非结1核分枝杆1菌病的分子病理检测方法;建立了利用高分辨溶解曲线法检测1线抗结1核核1心药1物利福平及异烟肼的耐药情况的分子病理检测方法。我们在首都临床医学发展专项的资助下进行大样本临床验证。这些方法也将陆续转化为我院分子病理诊断项目。







滴加FITC-TSA:滴加FITC-TSA试剂,避光室温反应5min。后TBST洗3次×10min,PBS洗1次×5min。

DAPI复染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。

镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)