武汉科锐诺生物科技有限公司

RNA原位杂交检测服务-科锐诺

武汉科锐诺生物科技有限公司

  • 主营产品:外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务
  • 公司地址:湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼
咨询热线: 18627856353
立即咨询 QQ咨询
信息详情
原位杂交是在分子生物学领域应用极为广泛的实验技术之一,是在研究生物体发育过程中的一种极为重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为insitu hybridization,其中in situ为拉丁文,字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处杂交。用已标记的核酸探针与组织切片或细胞中的待测核酸中的互补序列杂交, 从而对组织细胞中的核酸进行定性、定位和相对定量分析。是一种直接、简便的研究基因定位和表达的方法。基本原理--碱基互补配对原理









既要充分保留被测核酸,(特别是RNA)不被降解,又要尽可能维持原有组织或细胞的形态结构。

步骤:基本与免1疫组织化学技术相似,即组织要求新鲜和迅速投入固定液。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。取材过程中避免手指、唾液和未经RNA酶抑制处理的器具接触标本。冷冻切片以厚5~30um佳,40℃烤箱内干燥2小时后储存在-80℃超低温冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存数月之久。




水稻种子是人类重要的食物来源,其发育涉及一个复杂的调控网络,其中转录因子发挥了关键作用。MADS转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子,已有的研究表明,几乎所有的水稻MADS基因都在种子中表达,但对MADS家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。

在这项研究中,研究组基于前期的表达谱研究基础,分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子MADS29。细致分析表明,MADS29在花药、胚珠和种子中均表达,且在受精后的母体组织表达量高。MADS29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等,研究人员证明了MADS29通过调控程序化死1亡(PCD)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示,MADS29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达,进而影响胚乳发育。